尊龙凯时人生就博推出的pEGFP-ADRB2(human)质粒在生物医学研究中扮演着重要角色。以下是产品的详细信息和使用指南。

产品概述

产品名称：pEGFP-ADRB2(human)质粒
产品规格：05ug质粒干粉

使用注意事项

收到产品后，请根据管壁标签确认产品形态，并在扩增前查阅该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。

质粒扩增流程

1. **质粒干粉**（常温运输，存于-20℃，保质期90天）：
收到质粒干粉后，先以5000rpm离心1分钟，并加入20μl去离子水以溶解质粒；
取一支100μl感受态菌，置于冰上解冻10分钟，添加2μl质粒，随后在冰浴中保持30分钟，再进行42℃热激60秒，之后再冰浴2分钟。

注意：所有操作需在无菌条件下进行。
2. 加入900μl无抗LB液体培养基，震荡培养37℃ 45分钟；
3. 以6000rpm离心5分钟，保留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至对应抗性的LB平板；
4. 平板正向培养1小时，倒置在37℃培养14小时。如果条件要求是30℃，则培养20小时。
5. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14小时，使用质粒提取试剂盒进行质粒提取。

产品形式说明

1. **甘油菌种**（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天）：划线挑选单克隆培养。
2. **穿刺菌种**（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）：穿刺接种并进行液体培养后划线培养。
3. **菌落平板**（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）：直接挑取单菌落至液体培养基中。
4. **液体质粒**（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）：收到后可直接使用。
5. **滤纸质粒**（常温运输，存于-20℃，保质期90天）：收到后将滤纸剪下放入EP管，加入100μl无菌水浸泡5分钟后进行转化。

质粒提取的实验原理

碱裂解法提取质粒利用了共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的不同特性。在合适的pH范围内，染色体DNA解开并变性，而环状质粒DNA则维持其结构稳定。在后续操作中，通过精确的离心步骤，去除无法复性的大分子RNA和杂质，达到高纯度质粒提取的目的。

提取操作步骤

1. 准备20ml灭菌的培养管，编号并加入8ml LB培养基及8µl相应抗生素。
2. 用10µl枪头挑取单个菌落至培养管中，37℃震荡过夜。
3. 取2ml过夜培养液至离心管，室温10000rpm离心2分钟，去上清；
4. 加入250µl Buffer P1（含RNaseA），混匀；
5. 加入250µl Buffer P2，轻轻混合4-6次获得裂解液；
6. 加入350µl Buffer N3，温和混合并离心；
7. 上清液转移至洁净的吸附柱中再离心；
8. 加入150µl Buffer PB及400µl Buffer PW并进行离心和洗涤；
9. 加入90µl Buffer EB并进行最终的质粒洗脱。

注意事项

1. 在使用前，将RNA酶加入Buffer P1，存放于4℃。
2. Buffer EB在65-70℃水浴预热可提高提取效率。

如需更多信息或其他质粒载体，请咨询尊龙凯时人生就博。